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Test de la maladie COVID-19 ; utilisation de la fluorescence pendant une pandémie

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Alors que le monde continue à subir des pertes et des difficultés en raison de l'épidémie de COVID-19, causée par un nouveau coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2), les chercheurs s'efforcent de fournir des kits de test.

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À cette fin, plusieurs méthodes de diagnostic ont été conçues et testées, et un kit de test approuvé par la FDA américaine utilise la technique de la transcription inverse de la polymérase en temps réel par fluorescence (rRT-PCR). Le test rRT-PCR fonctionne en détectant les copies d'acide nucléique répliquées du virus du SRAS-CoV-2 par une sonde de fluorescence liée qui est libérée de son homologue quencher lors de la réplication de l'amorce

Une fois qu'un échantillon approprié est prélevé dans le système respiratoire d'un individu, l'ARN est isolé et transcrit à l'envers en ADN complémentaire (ADNc), qui subit ensuite le processus PCR pour amplifier le nombre de copies d'ADNc, avec plusieurs séries de cibles de détection d'amorces et de sondes du SRAS-CoV-2. Dans les ensembles de détection des sondes sont incorporées une paire de molécules qui sont liées en tandem comme émetteur de fluorescence et extincteur de couleur sombre (non émissif) ; la 5(6)-carboxyfluorescéine (FAM) comme émetteur, et le Black Hole Quencher - 1 (BHQ1) comme extincteur de couleur sombre (Figure 2). Lorsque le cycle PCR atteint la phase d'extension, l'activité de nucléase de l'amorce Taq polymérase à l'extrémité 5' rompt la FAM du BHQ-1 dans la sonde et sa fluorescence est alors mesurée en fonction de chaque cycle, en augmentant son intensité pour les diagnostics positifs.

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